腎上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物說明書

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產(chǎn)品描述：
腎上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物【Human Kidney MatchPair?: Normal Renal Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】
     腎上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物說明書人腎上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物是從人腎上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中提取的，人腎上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分別從正常人腎組織和腫瘤組織中制備。正常人腎組織和腫瘤組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及0mg總RNA。68℃反應(yīng)0min 后終止RT反應(yīng)。利用x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應(yīng)用： <>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。
技術(shù)傳授:
凍存培養(yǎng)基
腎上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物說明書凍存細(xì)胞時必須使用的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含0% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約00-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至0分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  °C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
以下是腎上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物說明書的相關(guān)產(chǎn)品：

兔抗NOS3多克隆抗體 英文名：Anti-NOS3 (Ab-77) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗ZAP70多克隆抗體 英文名：Anti-ZAP70 (Ab-39) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗PLCG2多克隆抗體 英文名：Anti-PLCG2 (Ab-753) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗YWHAZ多克隆抗體 英文名：Anti-YWHAZ(Ab-58) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗SMCA多克隆抗體 英文名：Anti-SMCA (Ab-957) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗BCR多克隆抗體 英文名：Anti-BCR (Ab-77) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗RPS6KA5多克隆抗體 英文名：Anti-RPS6KA5 (Ab-376) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗GABRB多克隆抗體 英文名：Anti-GABRB (Ab-434) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗VASP多克隆抗體 英文名：Anti-VASP (Ab-57) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗PTK2B多克隆抗體 英文名：Anti-PTK2B (Ab-402) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗STMN多克隆抗體 英文名：Anti-STMN (Ab-25) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗MET多克隆抗體 英文名：Anti-MET (Ab-234) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

腎上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物說明書Leonurine hydrochloride 鹽酸益母草堿 24697-74-3  20mg

EDTA Na2 乙二胺四乙酸二鈉 kg  瓶

Lipase 脂肪酶 5g  瓶

Indole-3-butyricacid(IBA) 吲哚-3-丁酸(水溶) g  瓶

Cy3 5 mg  支

2ml凍存盒 8孔  個

Melatonin 褪黑素 25g  瓶

結(jié)晶紫染色液(%) 0ml  瓶

高速增感屏 8×0  盒

BCIP-NBT底物顯色試劑盒 25ml  瓶

Trion X-00 曲拉通X-00 00ml  瓶

細(xì)胞可重發(fā)跟不可重發(fā)：
可以重發(fā)的情況有哪些？
（）細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
（2）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā)；
（3）存活的細(xì)胞靜置24小時后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā)；
（4）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時后并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；
（5）視具體情況而定。
腎上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物說明書出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）細(xì)胞狀態(tài)不好，未細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；