大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞提取物說明書

注意事項：
. 接收到大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞提取物說明書，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

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大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞提取物【Rat Eye: Normal Retinal Pigment Epithelial Cells Derivatives】
     大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞提取物說明書大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞提取物是從大鼠原代視網(wǎng)膜色素上皮細胞提取的，大鼠原代視網(wǎng)膜色素上皮細胞從正常大鼠眼組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及0mg總RNA。68℃反應0min 后終止RT反應。利用x RT Buffer 運輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學；<6>芯片研究與表達圖譜。?

兔抗TYK2多克隆抗體 英文名：Anti-TYK2 rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗UCHL多克隆抗體 英文名：Anti-UCHL rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗WNT5A多克隆抗體 英文名：Anti-WNT5A rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗ZYX多克隆抗體 英文名：Anti-ZYX rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗NUMBL多克隆抗體 英文名：Anti-NUMBL rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗NRH3多克隆抗體 英文名：Anti-NRH3 rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗MALT多克隆抗體 英文名：Anti-MALT rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

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兔抗SCCPH多克隆抗體 英文名：Anti-SCCPH rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

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兔抗MAX多克隆抗體 英文名：Anti-MAX rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞提取物說明書Methyl protodioscin 甲原 54522-52-0  20mg

Alpha-Naphthoflsvone 苯并黃素 604-59-  20mg

Bouin's固定液 00ml  瓶

CTAB 溴代十六烷基* 500g  瓶

EDTA脫鈣液（pH7.2） 500ml  瓶

Acetylcholine chloride 化乙酰 5g  瓶

Adenine Sulfate 腺嘌呤硫酸鹽 0g  瓶

人外周血淋巴細胞分離液 200ml  瓶

RNase A溶液 (0mg/ml) ml  瓶

馬IgG干粉 0mg  支

滅菌封瓶膜 6cm×6cm 500張  包

培養(yǎng)步驟：
大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞提取物說明書對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。