人成骨細胞說明書

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人成骨細胞【Human Bone: Normal Osteoblasts】
     人成骨細胞說明書 產品描述：成骨細胞是骨形成的主要功能細胞，負責骨基質的合成、分泌和礦化。公司提供的人成骨原代細胞均來自新鮮組織，用于培養人成骨原代細胞的組織采集于地方醫院，組織的采集根據美國IRB 和 HIPAA批準的方案進行。細胞的培養采用公司產品人成骨細胞培養試劑盒(Human Bone PrimaCell™: Normal Osteoblasts Cat No. 3-000)來優化目的細胞生長條件，以降低雜細胞（如脂肪細胞、纖維細胞等）的污染，同時保證質量的穩定。在公司技術部標準的操作流程下，人成骨原代細胞可以保持原代細胞的分化狀態，進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
      發貨：客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養瓶和相應的細胞密度。公司提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發貨的新鮮細胞還包含:、發貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養基；2、說明書及注意事項；3、公司售后服務標準。
      保存和應用：客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h，再進行后續的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應用。
培養步驟：
人成骨細胞說明書對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

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人肝癌細胞系，Hep-3B細胞  x 0^6 cells/T25培養瓶 細胞系
人肝癌細胞，Bel-7402細胞  x 0^6 cells/T25培養瓶 細胞系
人肝癌細胞，Bel-7404細胞  x 0^6 cells/T25培養瓶 細胞系
人肝癌細胞，Bel-7405細胞  x 0^6 cells/T25培養瓶 細胞系
人肝癌細胞，Hep G2細胞  x 0^6 cells/T25培養瓶 細胞系
人肝癌細胞，huh-7.5.細胞  x 0^6 cells/T25培養瓶 細胞系
人肝癌細胞，huh-7.5細胞  x 0^6 cells/T25培養瓶 細胞系
人肝癌細胞，huh-7細胞  x 0^6 cells/T25培養瓶 細胞系
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人肝癌細胞，SMMC-772細胞  x 0^6 cells/T25培養瓶 細胞系
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注意事項：
. 接收到人成骨細胞說明書，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。