（一）馬來酰亞胺類

    巰基作為備選的交聯基團具有以下優點：交聯位點確定，交聯反應可逆，可以實現順序交聯反應。馬來酰亞胺可在 pH6.5--7.5的條件下與巰基發生特異性反應形成穩定的巰醚鍵。中性 pH值條件下，馬來酰亞胺與巰基反應的速率快于氨基000倍。但是pH大于8.5時，反應更傾向于氨基。馬來酰亞胺不與、和發生反應。馬來酰亞胺在溶液中也會發生水解反應，尤其是在pH值大于8.0的條件下。水解反應會與巰基交聯反應發生競爭。反應溶液中應該避免自由巰基的存在。同樣，巰基化合物也可用于馬來酰亞胺交聯反應的終止。反應緩沖體系中添加 EDTA可以避免巰基的氧化。ELISA試劑盒

（二）鹵乙酰基類

    zui為常用的α-鹵乙酰基類交聯劑含有可以在生理pH值條件下與巰基反應的鹵乙酰基團。為保證巰基反應的特異性，通常選擇pH8.5條件，并且鹵乙酰基交聯劑輕微過量。鹵乙酰基交聯劑大量過量會與其他氨基酸發生非特異性反應。咪唑可以與鹵乙酰基類在pH6.9耀7.0條件下發生反應，但是反應孵育時間必須超過一周。ELISA試劑盒

    為抑制游離碘的生成，鹵乙酰基交聯反應應該閉光進行，因為游離鹵素可以與、和殘基發生反應。常用的NHS酯鹵乙酰基雙官能團交聯劑包括SIA、SIAB和硫化SIAB等。

（三）二硫代聯吡啶

    二硫代聯吡啶可與巰基在較寬pH值范圍內發生反應形成二硫鍵，pH值為4--5。由于反應后產生2-硫吡啶，因此可以通過檢測其在343nm的吸光度值判斷反應進行的程度。常用的二硫代聯吡啶類交聯劑包括LC-SPDP、硫化LC-SPDP和PDPH。

（四）酰肼類

    羰基化合物（醛酮類）可與酰肼和氨基在pH5耀7的條件下反應，與酰肼的反應速度快于氨基。此類交聯劑可以用于位點特異性的交聯反應。蛋白質分子中所含有的羰基并不是十分穩定，但是多糖鏈經高碘酸鈉輕度氧化后會經鄰近的羥基氧化成為醛基或酮基。通常此類氧化反應都是在閉光0--4℃條件下進行的，以此避免副反應的發生。隨后添加酰肼就可以形成腙鍵。此種交聯反應主要用于抗體的修飾方面，因為抗體的Fc段通常含有碳水化合物。0℃，mmol/L高碘酸鈉條件下，氧化反應于唾液酸殘基。如果濃度提高到6耀0mmol/L水平，那么蛋白分子中的其他碳水化合物也可以參與反應。

（五）碳二亞酰胺類

    碳二亞酰胺可以介導羧基與氨基或酰肼的反應，生成酰胺鍵或腙鍵。由于蛋白的末端及側鏈通常都含有羧基和氨基，所以使用此類交聯劑會造成蛋白多聚體的形成。所形成的共價鍵類似于蛋白分子的肽鍵，所以是十分穩定的，如果不破壞蛋白是不可能打開形成的交聯鍵的。ELISA試劑盒

    EDC〔-乙基-3-（3-二甲基氨丙基） -碳二亞胺〕是此類交聯劑中使用的一種，在半抗原的合成和酶的修飾中使用較多。其機制一般認為是蛋白殘基的羧基先同EDC反應，生成活潑的中間產物O-酰基異脲（O-acylisourea），這個中間產物再與親核基團，如氨基或羥基，發生反應。